پاورپوینت خالص سازی DNA از سلول‌هاي زنده

دسته بندي : علوم پزشکی » ژنتیک
چکیده:
آنزیم DNA پلیمر از مقاوم به حرارت به علت کاربرد آن در PCR و بیولوژی مولکولی توجه زیاد شده. هدف سنجش عملکرد تولید آنزیم DNA حساس به سرما و مقاوم به حرارت است. در باکتری و خالص سازی سریع و ارزان آن است. بعد از سنترژن به صورت مصنوعی سپس پلاسمید حاوی ژن تولید کننده آنزیم DNA به سویه E. ColIBl21 انتقال یافت. از IPTG به عنوان القاء گر برای بیان ژن استفاده می شود فعال سازی آنزیم توسط امواج اولتراسوند و به وسیله شوک حرارتی در 0c 72 و رسوب دهی پروتئین های نامحلول و به وسیله سانتریوفوژ انجام می گردد.
Taq DNA مقاوم به حرارت و حساس به سرما نوترکیب بیان شده در E. col برتری قابل توجه به عملکرد بهتری نسبت به آنزیم از نظر فعالیت و مقاوم در برابر حرارت است.
ژن تولید کننده آنزیم به محیط کشت LB مایع حاوی آنتی بیوتیک به مدت 3 ساعت در دمای 0c 37 جهت بهینه شدن پروتئین القاء کننده IPTG به محیط است به مدت 12 ساعت انکو به شده پس از القاء خالص سازی اولیه آنزیم توسط اولتراسوند و شکسته شدن دیواره سلول و شوک حرارتی در 0c 72 است.
لایه فوقانی توسط سانتریوفوژ جدا شده، از سوپرتانت به عنوان نمونه گیری استفاده می شود. برای تصفیه آنزیم به ستونی که فیلتر شده اضافه می شود. برای تنظیم PH با ضربه آن اضافه می شود. پس از خارج کردن بافر از ستون مدت 2 ساعت انکوبه می شود پروتئین ها جداسازی و خالص سازی  روی ژل SDS PAGE الکتروفورز و وزن خالص مشخص می شود.

فهرست مطالب:
مقدمه
چکیده و هدف
خالص سازی DNA از سلول های زنده
تهیه کل  DNA سلول
کشت دادن باکتری ها و برداشت سلول ها
دومین محیط کشت
تهیه عصاره سلولی
روش هایی که برای شکستن سلول ها فیزیکی و شیمیایی
خالص سازی DNA از عصاره سلولی
خارج کردن آلودگی ها با استفاده از حلال های آلی و هضم آنزیمی
استفاده از کروماتوگرافی تعویض یونی برای خالص کردن DNA از عصاره سلولی
تغلیظ نمونه های DNA
تهیه کل DNA  سلول
تهیه DNA پلاسمیدی
جداسازی براساس اندازه
جداسازی براساس ساختار فضایی
تهیه DNA باکتریوفاژ
کشت باکتری ها برای تهیه مقادیر زیاد فاژ لامبدا
خالص کردن DNA از ذرات فاژ لامبدا
شكستن ديواره سلولي و يا ليز كردن سلولها
جدا كردن مواد و DNA
نتیجه گیری


دسته بندی: علوم پزشکی » ژنتیک

تعداد مشاهده: 2352 مشاهده

فرمت فایل دانلودی:.rar

فرمت فایل اصلی: pptx

تعداد صفحات: 27

حجم فایل:1,013 کیلوبایت

 قیمت: 5,000 تومان
پس از پرداخت، لینک دانلود فایل برای شما نشان داده می شود.   پرداخت و دریافت فایل
  • راهنمای استفاده:
    مناسب جهت استفاده دانشجویان رشته ژنتیک، زیست شناسی و پزشکی


  • محتوای فایل دانلودی:
    در قالب فایل پاورپوینت و قابل ویرایش